El nuevo método CRISPR permite modificaciones eficientes del ADN

Con la revolucionaria tecnología CRISPR/Cas, el ADN de los organismos vivos se puede alterar con precisión. Utilizando un ARN guía que reconoce una secuencia de ADN específica, la proteína Cas9 se recluta en esa secuencia y corta el ADN. Este corte dirigido permite reparar o reemplazar el ADN en esta ubicación específica.

Prof. Biozentrum, Universidad de Basilea. El equipo de Markus Affolter ha desarrollado un nuevo método llamado Semilla/Cosecha en la mosca de la fruta (Drosophila melanogaster). Este enfoque combina la técnica CRISPR-Cas9 con la vía de reparación de recocido de cadena única (SSA), lo que permite realizar cambios en todo el genoma de manera más eficiente y sin dejar marcas no deseadas. El estudio fue publicado en Célula del desarrollo.

El proceso de siembra/cosecha se desarrolla en dos etapas. En el primer paso, los investigadores introducen un gen marcador en el sitio de ADN deseado en la región codificante de proteínas. Este marcador se coloca en la ubicación prevista y se utiliza para distinguir las modificaciones exitosas.

En un segundo paso, se extirpa el marcador y los puntos de rotura del ADN se reparan mediante la vía de reparación de recocido monocatenario (SSA). «Esto nos permite cortar el ADN sin problemas manteniendo su función completa», explica el primer autor Gustavo Aguilar. «La combinación de ambos métodos permite identificar cualquier proteína deseada en el genoma sin daños colaterales, lo que nos permite estudiar las funciones de las proteínas en los organismos vivos».

«Dado que para nuestra investigación queremos introducir y analizar cambios en el ADN en todo el genoma, el método debe ser preciso y eficaz», explica Affolter. «Y el método de semilla/cosecha es ambas cosas. Combina todas las ventajas de un etiquetado perfecto y una detección muy sólida de implantes exitosos».

Una ventaja del enfoque semilla/cosecha es que las proteínas pueden marcarse en tejidos y tipos de células específicos. «Ahora podemos controlar y determinar cuándo y dónde se activan o desactivan los genes en diferentes tejidos y etapas del desarrollo», añade Aguilar. Esto abre nuevas posibilidades para que la investigación investigue sistemáticamente la dinámica de las proteínas en células vivas en tiempo real.

Este método no sólo es importante para la genética y la biotecnología. «El enfoque semilla/cosecha es de interés para la investigación médica, por ejemplo para identificar defectos causados ​​por genes patógenos», dice Affolter.